Тест на основе полимеразной цепной реакции – один из самых чувствительных инструментов лабораторной диагностики.
Почему "ошибаются" ПЦР-тесты - эксперт
Узнайте, что такое ПЦР-анализ, виды тестов и показания к проведению диагностики, преимущества и недостатки метода. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – высокоточный метод молекулярно-генетической диагностики, который позволяет выявить у человека различные инфекционные и наследственные заболевания, как в острой и хронической стадии, так и задолго до того, как. ПЦР-тест представляет собой наиболее эффективный метод тестирования при диагностике вирусных инфекций.
Тестирование на коронавирус: как и когда сдавать?
| Одним мазком: тест на COVID-19 правдивее на восьмой день после заражения | Статьи | Известия | ПЦР-тест точнее всего определяет COVID-19 на третий-пятый день с момента появления симптомов, а экспресс-тест на антиген можно делать с первого дня. |
| Чем отличается ПЦР от антител на КОВИД тест? | Касательно самих ПЦР-тестов, которых к настоящему моменту зарегистрировано несколько десятков, принципиальных различий между ними, по мнению иммунолога, нет. |
Диагностика инфекций методом ПЦР: что это такое?
ПЦР — это полимеразная цепная реакция. читайте в медицинском журнале клиники Адмиралтейские Верфи. Иммунолог объяснил, почему ПЦР-тесты дают ошибочный результат. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это лабораторно–диагностическое исследование, позволяющее определить возбудителя той или иной инфекции.
О рекомендациях, как подготовиться к сдаче ПЦР-теста на COVID-19
Реакция российского общества, соучастие, будь это сдача крови для пострадавших или концерт в честь погибших в теракте в концертном зале «Крокус Сити Холл» показала, что коллективная память для жителей страны сильнее страха, который пытались внушить боевики. Тест на основе полимеразной цепной реакции – один из самых чувствительных инструментов лабораторной диагностики. По хорошему, если у пациента с симптомами тест ПЦР показал отрицательный результат, то человеку должны сделать и КТ, и тест на антитела», — заключил он. Экспресс-тест показывает только наличие или отсутствие антител (кровь берется из пальца). полимеразная цепная реакция. ПЦР тест на COVID-19 определяет только фрагмент вирусной РНК, именно поэтому.
7 вопросов про ПЦР-тест
И делаем мазок из носо- и ротоглотки и обнаруживаем там РНК. И очень много таких случаев, на самом деле Антон Ершов Доктор медицинских наук, практикующий врач, профессор Он объяснил, что у разных людей с разной скоростью обновляются клетки слизистой оболочки носоглотки и ротоглотки, и у некоторых части погибшего SARS-Cov-2 сохраняются в верхних дыхательных путях по несколько недель. У меня есть случаи, когда пациент был два с половиной месяца ложноположительный по ПЦР, это было в первую волну. И представляете, он измучился, не мог с карантина выйти Антон Ершов Доктор медицинских наук, практикующий врач, профессор По словам практикующего врача, понять, что результат теста ложноположительный, можно на двух основаниях: отсутствие каких-либо симптомов болезни и как минимум два отрицательных ПЦР-теста в следующие несколько дней.
Средства гигиены временно избавляют полость рта от следов вируса, которые ищет ПЦР-анализ. От спреев для носа и горла тоже придётся отказаться.
Антисептические свойства алкоголя исключают его употребление перед тестированием. Роспотребнадзор предлагает отказаться от спиртного за двое суток до ПЦР. Забор материала может быть не самым приятным процессом. Инструмент медика скользит по глотке пациента в течение нескольких секунд, пока не наберётся достаточно материала. Извлечь зонд слишком быстро — значит получить ненадёжный результат.
Материал доставляется в лабораторию в стерильных пробирках. Здесь будет проходить несколько циклов цепной реакции, которая призвана обнаружить РНК коронавируса.
Но для каждого микроорганизма реактив нужен свой, так что универсальных тестов ПЦР на все инфекции сразу не бывает. Подготовка к анализу зависит от того, какой биологический материал вы сдаете. Если кровь, то особо готовиться не надо. Для других материалов есть несложные правила — если их соблюдать, анализ будет точнее. Если вам назначили качественный ПЦР-анализ, имеет смысл сдавать его или в государственной лаборатории если обследование положено по ОМС , или в частной, где окажутся подходящие цены.
К такому выводу пришли зарубежные ученые, проанализировав более тысячи ПЦР-тестирований. С учетом особенностей поведения вируса в организме эти выводы закономерны и логичны, говорят российские эксперты. В первые дни после инфицирования концентрация патогена в организме еще слишком мала, чтобы это определил анализ, а через неделю-две иммунная система уже убивает SARS-Cov-2, и проверка дает ложноотрицательные результаты. Обнаружена связь между ложноотрицательным результатом анализа и наличием высоких тромбоцитов и С-белка в крови День X Сегодня для определения того, болен человек COVID-19 или нет, используют тесты на основе полимеразной цепной реакции ПЦР. Точность этого метода диагностики не абсолютная.
Диагностика методом ПЦР: современный подход выявления инфекционных и генетических заболеваний
| Тестирование на коронавирус: как и когда сдавать? - подробный гайд по анализам на COVID-19 | И ПЦР, и экспресс-тест помогают получить ответ на главный вопрос — есть ли у вас коронавирус. В чем разница? |
| ПЦР-тест и тест на антитела: в чём разница и что информативнее? Когда и какой тест нужно сдавать? | Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) является более точным способом выявления инфекции Covid-19. |
Ложноположительный ПЦР: Почему так бывает?
В результате известные фрагменты оказываются на обоих концах неизвестного участка, после чего можно проводить ПЦР как обычно. Этим методом часто определяют, где и когда экспрессируются данные гены. Используется в некоторых методиках секвенирования и гибридизационного анализа. ПЦР проводится как обычно, за исключением того, что один из праймеров берётся в большом избытке. ПЦР проводят при высокой температуре отжига, тем самым удаётся поддержать эффективности реакции на протяжении всех циклов [18]. В этом методе используют флуоресцентно меченые ДНК-зонды для анализа накопления продукта реакции или интеркалирующий краситель SYBR Green или его аналоги. Sybr Green I [en] обеспечивает простой и экономичный вариант для детекции и количественного определения ПЦР-продуктов в ходе ПЦР в режиме реального времени без необходимости использования специфичных флуоресцентных зондов или праймеров. Кроме главного, в спектре красителя имеются два небольших дополнительных максимума поглощения — при 290 нм и 380 нм.
Первые циклы проводят при температуре выше оптимальной температуры отжига, затем каждые несколько циклов температуру отжига постепенно снижают до оптимальной. Это делается для того, чтобы праймер гибридизовался с комплементарной цепью всей своей длиной; тогда как при оптимальной температуре отжига, праймер частично гибридизуется с комплементарной цепью. Частичная гибридизация праймера на геномной ДНК приводит к неспецифической амплификации, если участков связывания для праймера достаточно много. В точках, содержащих анализируемую ДНК, происходит амплификация с образованием молекулярных колоний. Вторая полимераза необходима для коррекции ошибок, внесённых первой, так как Taq-полимераза останавливает синтез ДНК, если был добавлен некомплементарный нуклеотид.
У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку. Процесс этот называется транскрипцией. Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка. Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК. Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу. Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию - адениновый A , содержащий аденин, гуаниновый G - гуанин, цитозиновый C - цитозин, тиминовый Т - тимин, урациловый U - урацил. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания. Праймер — котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка. Литература Глик Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Генетическая инженерия — Новосибирск: Сиб. Искусственные генетические системы — М. Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач.
Собираются при помощи пункции с использованием стерильного инструментария в количестве 0,1—1,5 мл в стерильные пробирки. Биоптаты, то есть материалы, полученные путем биопсии. Обычно на анализ отправляют биоптаты двенадцатиперстной кишки или желудка, чтобы выявить хеликобактерную инфекцию. Объем материала 2—3 мм3. Хранение и транспортировка биоматериала. Хранить образцы можно при комнатной температуре не более 2 часов. Оттаивание и повторное замораживание проб запрещено. Транспортировка, если она необходима, должна проводиться в специальных термоконтейнерах или термосах с соблюдением всех правил хранения и перевозки биоматериалов. Выделение ДНК из образца. Способ выделения зависит от вида определяемого микроорганизма и от вида биологического образца. Если, например, анализируется соскоб эпителиальных клеток, используется так называемый метод твердофазной сорбции, заключающийся в добавлении в образец специального вещества, концентрации ДНК на сорбенте и его многократной отмывке буферным раствором. Проведение ПЦР. Некоторое количество образца из биологической пробы переносится в специальную микроцентрифужную пробирку. Туда же добавляется амплификационная смесь, имеющая сложный состав, в объеме 25 мл. Пробирки устанавливают в программируемый термостат, и автоматическом режиме проводится амплификация. Время ее проведения зависит от заданной программы и составляет 2—3 часа. Одновременно с опытными пробами проводятся контрольные — положительные, включающие в себя контрольный препарат ДНК исследуемого возбудителя, и отрицательные, не содержащие исследуемую ДНК. Количество циклов амплификации варьирует от 30 до 40, более 40 циклов проводить не рекомендуется, так как это способствует увеличению количества неспецифических продуктов в пробе. Регистрация результатов. Фрагмент ДНК, характерный для возбудителя инфекции, выделяют методом электрофореза в присутствии специального вещества — бромистого этидия. Его соединение с фрагментами ДНК дает светящиеся полосы при облучении ультрафиолетовым излучением. Образец помещают в камеру для электрофореза и в течение 35—40 минут проводят разделение продуктов амплификации. После этого образец просматривают в ультрафиолетовом свете — наличие оранжевой светящейся полосы свидетельствует о положительном результате. Интерпретация результатов исследования. Результат ПЦР-диагностики может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный результат говорит о том, что в организме человека обнаружены следы инфекции, причем именно в данный момент времени. Количественный результат ПЦР-анализа оценить может только врач, они индивидуальны для разных типов инфекций.
По словам доктора медицинских наук, главная проблема в том, что тест-система видит фрагменты не только живых вирусных частиц. Это бывает, если человек переболел, может быть, даже несколько недель или месяца полтора тому назад, но у него остались не целые вирусные частицы, а разрушенные части вируса. В том числе РНК его разрушенное. И делаем мазок из носо- и ротоглотки и обнаруживаем там РНК.
В Роспотребнадзоре объяснили, чем отличается экспресс-тест на COVID-19 от ПЦР
Все ее члены переносят болезнь по-разному, но симптомы у всех одинаковые - утомляемость, температура, кашель. Но одним домочадцам при этом диагностируют коронавирус, другим ставят "пневмонию". Опытный вирусолог скажет, что такое невозможно, ведь все эти люди живут в одной квартире, пользуются одними и теми же вещами. Однако результаты ПЦР у всех разные. Почему такое происходит? Виноваты ли только "некачественные" тесты?
На эти вопросы корреспонденту Tengrinews. Представьте ситуацию: заболевает обычная казахстанская семья. Нужно понимать, что ПЦР-тест сдается не ради любопытства. Это способ выиграть время, которого позже, возможно, у человека не будет. Ведь если ему станет действительно плохо, то скорая помощь отвезет его сначала в провизорный госпиталь, где результата анализа придется ждать несколько дней.
И только потом пациента переведут в инфекционную больницу с необходимым оборудованием и врачами. Если же у вас на руках будет готовый положительный тест, медики будут знать, что вам нужна госпитализация. Так почему же ПЦР-тесты "ошибаются"? Ерлан Раманкулов говорит, что сами по себе ПЦР-тесты на коронавирус очень чувствительны. Однако порой они могут ошибаться, и, чтобы получить достоверный результат, приходится сдавать их несколько раз.
Происходит это по нескольким причинам.
Например, зондом нельзя собирать слюну и касаться щек, языка, десен или губ. По этой причине не стоит доверять наборам для самовзятия биоматериала. Цена ошибки высока: люди, получившие ложноотрицательные результаты, будут спокойно выходить в общественные места и заражать окружающих.
Со стороны пациента потребуется подготовка к ПЦР. За три часа до исследования нельзя есть, пить, курить, полоскать рот и жевать жвачку. За счет механизма работы ПЦР позволяет обнаружить вирус на самой ранней стадии, не дожидаясь конца инкубационного периода и появления первых симптомов. Еще одно преимущество — скорость.
Учитывая прочие факторы, такие как логистика, современные лаборатории могут озвучить результат уже через день. Антитела IgM и IgG Помимо ПЦР-исследования, существуют дополнительные методы диагностики, которые помогают уточнить стадию инфекции или узнать, что человек уже ее перенес. К ним относятся тесты на иммуноглобулины, или антитела — особые белки, которые организм вырабатывает в ответ на встречу с чужеродными агентами, в том числе вирусами и бактериями.
Это зависит от состояния иммунной системы человека, наличия сопутствующих заболеваний и многих других факторов.
В частности, при COVID-19 иммуноглобулины начинают формироваться в среднем через 7-14 дней после контакта с вирусом. Важно понимать, что поскольку антитела начинают вырабатываться не с первого дня инфицирования и заболевания, то и тест на антитела может быть отрицательным, ведь тестирование может попасть на период, когда организм ещё не успел сформировать иммунный ответ. Если тест на антитела дал отрицательный или неоднозначный результат и остались сомнения, то рекомендуется провести ПЦР-тест, так как именно этот метод позволяет выявить инфекцию на ранней стадии. Результаты тестов всегда оцениваются в совокупности с другими данными: эпидемиологическим анамнезом, клиническими симптомами, результатами компьютерной томографии лёгких или других обследований.
Коронавирус COVID-19 часто протекает незаметно, человек может не испытывать никаких симптомов, но при этом заражать окружающих. Прохождение периодического тестирования помогает своевременно обнаружить инфекцию и принять соответствующие меры. Для удобства и быстрого результата существуют также экспресс-тесты на коронавирус. Те же, кто переболел, могут быть более спокойными, так как учёные склоняются к мнению, что антитела дают защиту от повторного заражения.
Также вы можете пройти тест, если контактировали с больным и хотите проверить, был ли выработан в организме иммунитет.
Ann Intern Med. Troy Brown, RN.
May 2020. Нижегородская, д. Лекарственные препараты, информация о которых содержится на настоящем сайте, имеют противопоказания, перед их применением необходимо ознакомиться с инструкцией и проконсультироваться со специалистом.
Мнение Администрации может не совпадать с мнением авторов и лекторов.
В Роспотребнадзоре объяснили, чем отличается экспресс-тест на COVID-19 от ПЦР
Согласно требованиям Роспотребнадзора, если у пациента выявлен коронавирус, для выписки и подтверждения выздоровления необходимо два отрицательных результата. Анализ показывает количество антител IgM и IgG. Иммуноглобулины М говорят об активном иммунном ответе, то есть о том, что человек сейчас болеет коронавирусом. Иммуноглобулины G говорят о том, что человек уже переболел, и у него выработался иммунитет к вирусу. Всего с начала применения метода ИФА уже проведено более 235 тысяч исследований. Из них более 18 тысяч тестов были сделаны для пациентов нековидных отделений стационаров. ИФА-исследования проходят: все сотрудники медицинских организаций Департамента здравоохранения — еженедельно, пациенты стационаров — в день госпитализации, пациенты дневных стационаров и КТ-центров — при первом обращении, пациенты поликлиник по направлению врача , Москва также дополнительно обеспечивает проведение ИФА-тестов пациентам медицинских организаций Московской области — до 10 тыс. На сегодня для них проведено уже более 15 тысяч тестов. С 15 мая на ИФА-тестирование в городские поликлиники приглашаются москвичи в рамках исследования формирования иммунитета к коронавирусу. Массовое ИФА-тестирование позволит выявить три категории людей: Бессимптомных носителей, у которых болезнь никак не проявляется, но они могут заражать других, не подозревая об этом.
Пациентов с легкой и средней степенью течения болезни, у которых с момента заражения прошло две недели.
Для теста у вас возьмут мазок из ротоглотки и носа, поместят в транспортную среду и отправят в лабораторию, спустя 4 часа результат будет готов. Да, процедура взятия биологического материала, мягко говоря, дискомфортная, но лучше так, чем дырявить себе пальцы. Тест на антиген выполняется в течение 4 часов, то есть результат можно получить день в день. Слабые стороны теста такие же, как у ПЦР: почистил зубы, покурил, поел и т. Поэтому необходимо соблюдать рекомендации сдачи анализа. Тут, помимо положительного и отрицательного результата, есть еще и сомнительный — это когда человек только заболевает и белок еще не выработался в нужных для определения объемах. В таких случаях рекомендуется переделать анализ через 5 дней. Правила сдачи ИФА на ковид Подготовка к тесту на антиген будет следующей: За сутки отказаться от алкогольных напитков, даже пива и вина. За 12 часов — не пользоваться средствами антисептики и обезболивания для ротовой полости аэрозоли для орошения горла, рассасывающие таблетки, полоскания.
Это свидетельствует о том, что при обнаружении вирусной РНК на этой стадии люди перестают быть заразными. Поэтому Корейский центр по управлению и контролю за болезнями больше не требует изоляции в таких случаях. В общей популяции пациенты у которых была коронавирусная инфекция в течение 10-14 дней, вероятно, больше не представляют опасность для окружающих. Однако это правило может не распространяться на все категории пациентов, в частности, иммунокомпрометированных пациентов или тяжело больных пациентов, находящихся в больнице.
Ann Intern Med. Troy Brown, RN.
Плеер автоматически запустится при технической возможности , если находится в поле видимости на странице Адаптивный размер Размер плеера будет автоматически подстроен под размеры блока на странице. Его берут из носовой пазухи — места наибольшей концентрации вируса. В случае ПЦР биоматериал берут дважды, через нос и через рот, смешивают с физраствором и отправляют в лабораторию.
Всегда ли положительный тест на COVID-19 означает, что пациент заразен?
Что такое ПЦР-тест, и для чего его сдают. ПЦР – это тест, позволяющий определить или исключить наличие конкретной инфекции у пациента, то есть исследование представляет собой этиологическую диагностику патогенного возбудителя. По последним данным, ПЦР-тест положителен только у 30-40% пациентов с подозрением на коронавирус. Обзор 28 исследований показывает, что ПЦР-тест остаётся положительным в среднем 18 дней. Однако у примерно 20% людей ПЦР-тест остается положительным еще в течение нескольких месяцев.